发表刊物：黑龙江畜牧兽医 . 2025 (08)

摘要：为了能快速鉴别B亚型禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus B,aMPVB）与其他禽类常见病毒，试验基于aMPVB F基因的保守区域设计一套特异性环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplilication, LAMP）引物，包括外引物F3和B3,内引物FIP（F1c+F2）和BIP（B1c+B2）,环引物Floop和Bloop,其中FIP的5′端用淬灭基团BHQ2标记，同时在F3、B3之间引入1条探针FD,其3′端用CY5荧光基团标记，建立可视化荧光RT-LAMP方法，对该方法进行反应条件优化及特异性、敏感性检测，并利用该方法对临床样品进行检测。结果表明：建立的可视化荧光RT-LAMP方法的最佳探针复合物浓度为0.32μmol/L,最佳反应温度为63℃;该方法仅能检测到aMPVB,其他17种禽类常见病毒均呈阴性；对aMPVB的最低检出限为1.2×102 copies/μL,敏感性是普通PCR方法(1.2×103 copies/μL)的10倍。该方法的反应时间为60 min,约为普通PCR方法的一半，大大提高了检测效率。利用该方法对采自广西地区的23份临床样本进行检测，结果与普通PCR方法完全一致。说明该方法能够快速、准确地检测aMPVB,特异性好，敏感性高，具有良好的实际应用价值。