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发明专利:一种检测阿米巴的PCR引物及方法(ZL 201810077844.4)

发布时间:2020-07-20 15:32:16 浏览量:284

       阿米巴原虫病主要是由溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica) 引起的一种高发病率、高度致病性的人兽共患寄生性原虫病。该原虫多寄生于人和动物的肠道和肝脏,引发阿米巴痢疾或肝脓肿。临床上表现发热、腹痛腹胀、呕吐、恶臭痢疾血便等症状,病理剖解多见肠炎、肠道出血水肿、溃疡、增生等,个别病例肝脏上出现脓肿。阿米巴原虫病分布范围广泛,易感动物较多,呈世界性流行传播。自1875 年Feder Lo sch 首次在人体发现该原虫以来,该病已给人和动物的健康带来了严重的影响,同时也造成了巨大的经济损失。比如食蟹猴等动物被阿米巴原虫感染,不仅给养殖业带来经济损失,还严重影响动物质量和动物跟踪研究检测结果的准确性,同时威胁动物饲养人员、兽医工作者及相关密切接触人群身体健康,因此快速的检测出阿米巴原虫感染情况,及时控制清除病原,保持动物的清洁,具有重要的公共卫生意义和研究意义。

       本发明设计利用现代分子生物学理论知识、核酸扩增技术,针对阿米巴原虫设计的特异性引物,建立一套快速、灵敏、准确检测阿米巴原虫的PCR检测方法,该技术不同于ELISA方法和镜检的方法。采用ELISA抗体检测的方法只能检测抗体,不能检测病原,因此很难区别是新近感染还是既往感染,且成本费用较高等缺点;采用镜检的方法存在很多缺点或不足:操作比较繁琐,需自己配制染色液-碘液,对样品进行染色才能观察;对操作人员身体健康影响较大,碘液染色液易挥发,形成刺鼻的气味,刺激操作者眼睛和鼻子,使操作者身体健康受到威慑;常常受杂质影响较大,显微镜检查时检出率较低,而且要求显微镜操作者非常熟悉各类原虫及卵囊形态,否则难以找到原虫;对于大批量的样品检测,需要大量的人力物力,特别是显微镜观察者眼睛极易疲劳,难以在短时间内完成大量检测样品的工作。因此,本发明使用PCR方法可以快速、准确地得出结果,该方法不仅具有较高的敏感度,特异性强,而且操作简便,只需按建立的体系加样即可,为简便、快捷准确地检测阿米巴原虫带来便利。该技术将为早期判断和大批量检测样品提供技术支持,为今后食蟹猴等动物阿米巴原虫病临床诊断、病原监测、进出口检验检疫以及综合防控提供指导。

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